无菌方法学验证方案(无菌检查的方法？)

中国药典无菌检查法的检验条件

单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

产品达到A级或B级商业无菌要求按《液体食品包装设备验收规范》（征求意见稿）检验方法如下：（1）菌落总数测定按GB4789．2规定进行。（2）大肠菌群测定按GB4789．3规定进行。（3）沙门氏菌检验按GB4789．4规定进行。（4）志贺氏菌检验按GB4789．5规定进行。

按照中国药典2005年版微生物限度检查法进行细菌、霉菌及酵母菌计数的方法学验证试验及菌落计数。

已经灭菌的培养基灭菌时残留有生命力的孢子或在贮存时有可能被杂菌污染。

无菌检查的方法?

无菌检查方法的适用性测试，需结合产品特性与相关指导原则，确保方法的有效性和无毒性。薄膜过滤法和直接接种法是主要手段，需与对照实验对比，确保方法的准确性。无论是学习还是实际操作，都应紧密关联SOP（标准操作程序）。

(四〕实验方法 (1)倒平板：按常法配置上述培养基，分装于三角瓶中，高压灭菌备用。临用前将培养基熔化，冷却至50℃左右，倒平板若干个备用。 (2)检测：先将无菌室的紫外灯打开，照射15min后关闭。

2．2 方法学验证 2．3．1 试验组(样品 阳性) 取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250 ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100 ml，充分振摇。

GB/T 18204.1-2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定 无菌室是进行细菌、霉菌等定性、定量的实验场所。

无菌试验 抽取少量培养基做无菌试验,按照卫生消毒规范或药典上的方法操作（简单地说取少量灭菌好的物体分别进行有氧、厌氧、真菌培养,7天后培养液不浑浊并且镜检无菌）,灭菌彻底则应该可以通过无菌试验.预培养 将配置好的培养基按其需要培养24-48小时,至少过夜,如果是固体培养基则无任何菌落生长。

无菌产品的生产依赖于精密的灭菌方法，这些方法包括物理和化学手段，如湿热、干热、辐射、气体和过滤除菌等。无菌保证并非单纯依赖最终产品的检测，而是生产过程中的灭菌工艺、GMP管理和质量控制体系的综合结果。

面试无菌技术怎么回答?

面试无菌技术是需要准备的。2. 因为无菌技术在实验室和医疗领域中非常重要,面试官希望了解你对无菌技术的理解和掌握程度。

下面一起来了解一下消毒液消毒效果验证方案吧！消毒液消毒效果验证怎么做随机取物体表面（设备表面、台面、门等），用规格板标定2块面积各为25cm_的区块，一供消毒前采样，一供消毒后采样。消毒前，将无菌棉拭于含5ml中和剂试管中沾湿，对一区块涂抹采样，横竖往返各8次。

无菌验证采用枯草芽孢杆菌黑色变种的芽孢 芽孢杆菌属细菌在自然界分布较为广泛，由于能够产生抗逆性内生孢子，因此可耐受各种不良环境，如可以在pH为2～3的地方生存，也可以在温度高达80℃甚至更高温度的地方生长，而南极寒冷的冰雪中也能见到它们的踪迹。 菌株操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。

测定供试液的pH值,若不在鲎试剂的有效缓冲pH范围(6.0～8.0),可选用一定浓度的HCl或NaOH将pH值调节至6.0～8.0,但要注意应进行方法学验证(干扰试验),确保不干扰鲎试验检查,且对内毒素检查结果无影响。

青霉素钠无菌检查的方法验证

目的 建立健全青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。

方法 采用薄膜过滤法进行。

1.培养基及其制备方法

培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处 　　方生产的符合规定的脱水培养基。以下培养基制备时，均以115℃灭菌30分钟。 　　1.需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐流体培养基) 　　酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 　　葡萄糖 5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml 　　L－胱氨酸 0.5g (或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5ml) 　　硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g 　　(或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml 　　酵母浸出粉 5g 　　除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性， 　　煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装， 　　灭菌。 　　在供试品接种前, 培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则,须 　　经水浴煮沸加热, 只限加热一次。

2.选择性培养基

(1) 对氨基苯甲酸培养基（用于磺胺类药物的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌 　　培养基及真菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后，摇匀,分装,灭 　　菌。 　　(2) 聚山梨酯80培养基（用于油剂药品的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌培养基 　　及真菌培养基的处方及制法，各加10ml聚山梨酯80，摇匀，分装，灭菌。

3.操作

按该药品项下规定的方法处理后, 加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶剂至少100ml中, 混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长。将需气菌、厌气菌培养基，真菌培养基用阳性对照管用培养基分别加至薄膜过滤器内（封闭式过滤器），或取出滤膜分成3等份,分别加入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。阳性对照管应根据供试品特性加入相应对照菌液1ml(抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌)。阳性对照管细菌应在培养24～48小时，真菌应在培养24～72小时有菌生长。结果判断当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定。

结果判断 如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长,均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。

讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。